Estudio piloto de caracterización microbiológica de los billetes que circulan en la ciudad de Bucaramanga, Colombia / Pilot Study of Microbiological Characterization of Banknotes Circulating in the City of Bucaramanga, Colombia / Estudo piloto de caracterização microbiológica das notas em circulação na cidade de Bucaramanga, Colômbia

Introducción. Los billetes son un potencial medio de transmisión de microorganismos capaces de producir enfermedades. Es el caso del Staphylococcus aureus, una bacteria distribuida por toda América Latina, causante de infecciones y resistente a antibióticos de uso común. El objetivo del estudio es realizar una caracterización bacteriana y fúngica de billetes circulantes en la ciudad de Bucaramanga, y en especial identificar algunos que puedan relacionarse con problemas de salud pública. Metodología. Estudio observacional y cuantitativo, con una muestra de 50 billetes (5 diferentes denominaciones de 2 fechas de emisión). Se identificaron y cuantificaron los microorganismos mediante siembra en caldo peptona, posteriormente en agar Reasoner´s 2A (R2A), nutritivos y selectivos, además del uso de técnicas de índice analítico de perfil (API) y microscopia óptica. Se realizó un análisis estadístico de correlación de variables mediante el software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Resultados. Se identificaron 21 géneros y 12 especies de bacterias, así como 3 géneros y 2 especies de hongos filamentosos, entre ellos algunos que pueden ocasionar infecciones como Klesiella, Enterobacter, Listeria, Staphylococcus, Cryptococcus y Aspergillus. Discusión. En relación con estudios internacionales, en este trabajo se identificaron menos tipologías de microorganismos, lo cual se explica en razón a las limitaciones propias de las técn icas utilizadas y del nivel de contaminación local. Conclusión. Se pudo establecer que el grado de contaminación microbiana no depende significativa o consistentemente de la fecha de emisión ni de la denominación; pero la identificación de patógenos sugiere plantear medidas para limitar su transmisión por esta vía.

Introduction. Banknotes are a potential means of transmission of microorganisms capable of producing diseases. This is the case of Staphylococcus aureus, a bacterium distributed throughout Latin America, which causes infections and is resistant to commonly used antibiotics. The objective of the study is to perform a bacterial and fungal characterization of banknotes circulating in the city of Bucaramanga, and especially to identify some that may be related to public health problems. Methodology. Observational and quantitative study, with a sample of 50 banknotes (5 different denominations of 2 issue dates). Microorganisms were identified and quantified by seeding in peptone broth, then on Reasoner's 2A agar (R2A), nutrient and selective, in addition to the use of analytical profile index (API) and light microscopy techniques. A statistical analysis of correlation of variables was performed using the Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) software. Results. Twenty-one genera and 12 species of bacteria were identified, as well as 3 genera and 2 species of filamentous fungi, including some that can cause infections such as Klesiella, Enterobacter, Listeria, Staphylococcus, Cryptococcus, and Aspergillus. Discussion. In comparison with international studies, this study identified fewer types of microorganisms, which is explained by the limitations of the techniques used and the level of local contamination. Conclusion. It was possible to establish that the degree of microbial contamination does not depend significantly or consistently on the date of issue or the denomination; but the identification of pathogens suggests that measures should be taken to limit their transmission by this ro ute.

Introdução. As notas são um meio potencial de transmissão de microrganismos capazes de produzir doenças. É o caso do Staphylococcus aureus, bactéria distribuída por toda a América Latina, causadora de infecções e resistente aos antibióticos comumente utilizados. O objetivo do estudo é realizar uma caracterização bacteriana e fúngica das notas em circulação na cidade de Bucaramanga e, principalmente, identificar algumas que possam estar relacionadas a problemas de saúde pública. Metodologia. Estudo observacional e quantitativo, com uma amostra de 50 notas (5 denominações diferentes de 2 datas de emissão). Os microrganismos foram identificados e quantificados por meio de semeadura em caldo peptonado, depois em ágar Reasoner 2A (R2A), nutritivo e seletivo, além da utilização de índice de perfil analítico (API) e técnicas de microscopia óptica. Foi realizada uma análise estatística de correlação das variáveis por meio do software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Resultados. Foram identificados 21 gêneros e 12 espécies de bactérias, além de 3 gêneros e 2 espécies de fungos filamentosos, incluido alguns que podem causar infecções como Klesiella, Enterobacter, Listeria, Staphylococcus, Cryptococcus e Aspergillus. Discussão. Em relação aos estudos internacionais, neste trabalho foram identificados menos tipos de microrganismos, o que se explica pelas limitações das técnicas utilizadas e pelo nível de contaminação local. Conclusão. Foi possível estabelecer que o grau de contaminação microbiana não depende de forma significativa ou consistente da data de emissão ou da denominação; mas a identificação de patógenos sugere considerar medidas para limitar sua transmissão por essa via.

Yeast microbiota of free-ranging amphibians and reptiles from Caatinga biome in Ceará State, Northeast Brazil: High pathogenic potential of Candida famata / Leveduras da microbiota de anfíbios e répteis do bioma Caatinga no Ceará, Nordeste do Brasil: alto potencial patogênico de Candida famata

ABSTRACT: Studies on the fungal microbiota of reptiles and amphibians are necessary to better understand of host-microbe interactions and the establishment of fungal disease in these animals. However, these studies are limited. The present researchidentified yeasts from free-ranging reptiles and amphibians from the Caatinga biome andevaluated the virulence factors production, the antifungal susceptibility in planktonic and biofilm growth and the pathogenicity of Candida famata isolates. Twenty-nine isolates of the genera Candida, Cryptococcus and Rhodotorula were identified by phenotypic and/or molecular methods and production of hydrolytic enzymes in vitro by these genera of fungi was evaluated. In addition, susceptibility of planktonic cells and biofilms to azoles and amphotericin B was evaluated. The pathogenicity of C. famata, the most prevalent yeast species isolated, was evaluated using Caenorhabditis elegans model. C. famata was the most prevalent yeast in amphibian and reptilian microbiota. Phospholipase and protease production was observed in 18/29 and 11/29 of the yeast isolates, respectively, while 100% formed biofilms. Itraconazole presented high minimal inhibitory concentrations against C. famata and C. tropicalis. Amphotericin B reduced the biomass and metabolic activity of biofilms. C. famata induced the mortality of C. elegans. In conclusion, reptiles and amphibians are colonized by yeasts capable of producing important virulence factors, especially by Candida spp. that present low susceptibility to azoles which may result from imbalances in ecosystem. Finally, C. famata isolated from these animals presented high pathogenicity, showing the importance of the study of reptile and amphibians fungal microbiota.

RESUMO: Estudos sobre a microbiota fúngica de répteis e anfíbios são necessários para melhor compreender as interações hospedeiro-microrganismo e o estabelecimento de doenças fúngicas nesses animais. No entanto, esses estudos são limitados. O objetivo da presente pesquisa foi identificar leveduras isoladas de répteis e anfíbios do bioma Caatinga e avaliar a produção de fatores de virulência, a sensibilidade a antifúngicos no crescimento planctônico e de biofilme e a patogenicidade de Candida famata. Vinte e nove isolados dos gêneros Candida, Cryptococcus e Rhodotorula foram identificados por métodos fenotípicos e/ou moleculares e a produção de enzimas hidrolíticas in vitro por esses gêneros de fungos foi avaliada. Além disso, foi avaliada a suscetibilidade de células planctônicas e biofilmes a azólicos e anfotericina B. A patogenicidade de C. famata, a espécie de levedura isolada mais prevalente, foi avaliada usando Caenorhabditis elegans. C. famata foi a levedura mais prevalente na microbiota de anfíbios e répteis. A produção de fosfolipase e protease foi observada em 18/29 e 11/29 dos isolados de levedura, respectivamente, enquanto 100% formaram biofilmes. O itraconazol apresentou altas concentrações inibitórias mínimas contra C. famata e C. tropicalis. A anfotericina B reduziu a biomassa e atividade metabólica dos biofilmes. C. famata induziu a mortalidade de C. elegans. Em conclusão, répteis e anfíbios são colonizados por leveduras capazes de produzir importantes fatores de virulência, especialmente por cepas de Candida spp. que apresentam baixa suscetibilidade a azólicos que podem resultar de desequilíbrio no ecossistema. Por fim, C. famata isolados desses animais apresentaram alta patogenicidade, mostrando a importância do estudo da microbiota fúngica de répteis e anfíbios.

Prevalence, antifungal susceptibility and virulence determinants of oral yeast species isolated from immunodeficient patients in Northeastern Brazil / Prevalência, suscetibilidade a antifúngicos e determinantes de virulência de leveduras orais isoladas de pacientes imunodeficientes do Nordeste do Brasil / Prevalencia, susceptibilidad antifúngica y determinantes de virulencia de levaduras orales aisladas de pacientes inmunodeficientes del Noreste de Brasil

Justificativa e Objetivos: A candidíase oral tem uma ocorrência comum em pacientes imunocomprometidos. No entanto, outras infecções emergentes tornaram-se cada vez mais habituais. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência, os determinantes de virulência e a suscetibilidade a antifúngicos de leveduras que colonizam a mucosa de pacientes imunocomprometidos na região Nordeste do Brasil. Métodos: A amostra foi composta por 60 pacientes HIV positivos atendidos no Serviço de Atendimento Especializado/Hospital Dia do Hospital Universitário Prof. Alberto Antunes, vinculado à Universidade Federal de Alagoas. As amostras foram coletadas em regiões subgengivais e semeadas em CHROMagar para confirmação presuntiva de Candida spp., seguido por PCR e sequenciamento. Além disso, testamos os determinantes de virulência fosfolipase e protease e avaliamos in vitro a concentração inibitória mínima dos antifúngicos anfotericina B e fluconazol. Este projeto foi aprovado pelo Comitê de ética em pesquisa do Centro de Estudos Superiores de Maceió. Resultados: Aproximadamente 63% dos pacientes foram colonizados por leveduras. A espécie C. albicans foi predominante, enquanto as espécies de Candida não-albicans representaram 49% dos isolados, sendo C. dubliniensis e C. parapsilosis as mais comuns. Entretanto, C. intermedia, Bullera penniseticola e Naganishia liquefaciens também foram encontrados. Os determinantes da virulência protease e/ou fosfolipase também foram produzidos por Candida spp. e alguns isolados oportunistas incomuns como Kodamaea ohmeri, N. liquefaciens e Saitozyma podzolica. Além disso, a maioria dos isolados de Candida spp. e algumas espécies oportunistas incomuns apresentaram altos valores de concentração inibitória mínima. Conclusão: Os resultados obtidos indicam que C. albicans continua a ser a espécie predominante na cavidade oral de pacientes imunodeficientes e, juntamente com outras espécies incomuns, pode apresentar alta resistência aos antifúngicos testados.(AU)

Background and Objectives: Oral candidiasis has a common occurrence in immunocompromised patients. However, other emergent infections have become increasingly common. The aim of this study was to investigate the prevalence, virulence determinants and the antifungal susceptibility of yeast colonizing the mucosa of immunocompromised patients in Northeastern Brazil. Methods: Samples from sixty HIV-positive patients seen at the Specialized Service / Hospital Dia - Hospital Universitário Prof. Alberto Antunes from the Federal University of Alagoas were collected from subgingival sites and seeded on CHROMagar for presumptive confirmation of Candida spp. followed by PCR and sequencing. In addition, we tested virulence determinants, phospholipase and protease and evaluated in vitro the Minimum Inhibitory Concentration of antifungals amphotericin B and fluconazole. This project was approved by the Research Ethics Committee of the Center for Higher Studies in Maceió. Results: Approximately 63% of the patients were colonized by yeasts, with C. albicans as the predominant species, while non-Candida albicans species accounted for 49% of the isolates, with C. dubliniensis and C. parapsilosis being the commonest, but C. intermedia, Bullera penniseticola and Naganishia liquefaciens were also found. The virulence determinants protease and/or phospholipase were also produced by Candida spp. and some uncommon opportunistic isolates such as Kodamaea ohmeri, N. liquefaciens and Saitozyma podzolica. Furthermore, most of Candida spp. strains and some uncommon opportunistic species showed high values of minimal inhibitory concentration. Conclusion: Results obtained indicate that C. albicans continues to be the predominant species in oral cavity of immunodeficient patients and along with other unusual species may present high resistance to the antifungals tested.(AU)

Justificación y Objetivos: La candidiasis oral acomete con frecuencia a pacientes inmunocomprometidos. Sin embargo, otras infecciones emergentes se han vuelto cada vez más comunes. El objetivo de este estudio fue investigar la prevalencia, la producción de determinantes de virulencia y la susceptibilidad a antifúngicos de levaduras que colonizan la mucosa de pacientes inmunocomprometidos en la región Nordeste de Brasil. Métodos: Se colectaron muestras de sesenta pacientes VIH positivos atendidos en el Servicio de Atención Especializado/Hospital Día del Hospital Universitario Prof. Alberto Antunes, vinculado a la Universidad Federal de Alagoas. Se colectaron las muestras en las regiones subgingivales y las sembraron en CHROMagar para la presunta confirmación de Candida spp. seguido de PCR y secuenciación. Además, analizamos los determinantes de virulencia fosfolipasa y proteasa y evaluamos in vitro la concentración mínima inhibitoria de los antifúngicos anfotericina B y fluconazol. Este proyecto fue aprobado por el Comité de Ética en Investigación del Centro de Estudios Superiores de Maceió. Resultados: Aproximadamente el 63% de los pacientes fueron colonizados por levaduras, y la C. albicans fue la especie predominante, mientras que las especies de Candida no-albicans representaron el 49% de los aislamientos, de las cuales la C. dubliniensis y la C. parapsilosis fueron las más comunes. Sin embargo, también se encontraron C. intermedia, Bullera penniseticola y Naganishia liquefaciens. Los determinantes de virulencia de proteasa y/o fosfolipasa también fueron producidos por Candida spp. y algunos aislados oportunistas inusuales como Kodamaea ohmeri, N. liquefaciens y Saitozyma podzolica. Además, la mayoría de los asilados de Candida spp. y algunas especies oportunistas inusuales mostraron valores altos de concentración mínima inhibitoria. Conclusión: Los resultados obtenidos indican que C. albicans continúa siendo la especie predominante en la cavidad oral de pacientes inmunodeprimidos y, junto con otras especies poco comunes, puede presentar una alta resistencia a los antifúngicos evaluados.(AU)

Sensitivity to antifungals by Candida spp samples isolated from cases of chronic atrophic candidiasis (CAC) / Sensibilidade a antifúngicos por amostras de Candida spp isoladas de casos de candidíase atrófica crônica (CAC)

Abstract The treatment of choice for chronic atrophic candidiasis (CAC), also known as denture stomatitis, is topical antifungal therapy. This study aimed to isolate, identify, and assess the antifungal susceptibility of Candida species from mucosal sites in denture wearers with a diagnosis of CAC and determine the prevalence of associated variables. The sample consisted of 44 patients wearing complete or partial dentures who had a clinical diagnosis of CAC. Using sterile cotton swabs, specimens were collected from the oral mucosa of all patients and grown at 30ºC for 48 h in CHROMagar Candida, as a means of isolating and screening the species. The complementary identification of the species was performed using the VITEK 2 automated system (BioMérieux), as well as the determination of their susceptibility to antifungal agents. Data were analyzed using the chi-square test. STATA 13.1 was used for statistical analysis (α = 5%). Of 44 patients with CAC, 33 (75%) had lesions classified as Newton type II. Yeasts were isolated in 38 cases. The most prevalent species was Candida albicans. None of the isolates were resistant to the antifungals tested. Our findings suggest that current indications for antifungal agents are appropriate. Also, antifungal susceptibility testing and proper fungal identification can help dentists to determine the optimal course of treatment for CAC.

Resumo O tratamento de escolha para candidíase atrófica crônica (CAC), também conhecida como estomatite protética, é a terapia antifúngica tópica. Este estudo teve como objetivo isolar, identificar e avaliar a susceptibilidade antifúngica de espécies de Candida de locais mucosos em portadores de prótese com diagnóstico de CAC e determinar a prevalência de variáveis associadas. A amostra consistiu em 44 pacientes portadores de próteses completas ou parciais que tiveram um diagnóstico clínico de CAC. Usando swab estéril, foram coletados espécimes da mucosa oral de todos os pacientes e cultivados a 30ºC durante 48 h em CHROMagar Candida, como forma de isolamento e triagem das espécies. A identificação complementar das espécies foi realizada no sistema automatizado VITEK 2 (BioMérieux), bem como a determinação da susceptibilidade delas a agentes antifúngicos. Os dados foram analisados usando o teste do qui-quadrado. O STATA 13.1 foi utilizado para análise estatística (α = 5%). Dos 44 pacientes com CAC, 33 (75%) apresentaram lesões classificadas como Newton tipo II. As leveduras foram isoladas em 38 casos. A espécie mais prevalente foi Candida albicans. Nenhum dos isolados foi resistente aos antifúngicos testados. Nossas descobertas sugerem que as indicações atuais para os agentes antifúngicos são apropriadas. Além disso, testes de susceptibilidade antifúngicos e identificação fúngica adequada podem ajudar os dentistas a determinar o curso ótimo de tratamento para CAC.

Compêndio de métodos e de boas práticas em coleção de cultura de leveduras do Instituto de Biologia do Exército / Compendium of methods and good practices in yeast culture collection of the Brazilian Army Biology Institute

Objetivo: O Compêndio de Métodos e de Boas Práticas em Coleção de Cultura de Leveduras do Instituto de Biologia do Exército (IBEx) foi elaborado com o propósito de operacionalizar as atividades de pesquisa, garantindo o desempenho seguro e confiável dos seus objetivos regimentais. Métodos: A Coleção de Cultura de Leveduras do IBEx foi criada a partir de cepas isoladas de quadros de candidíase sistêmica, através da utilização de metodologias manuais e automatizadas para autenticação das mesmas, com o propósito de garantir a pesquisa científica e atividades de ensino. Resultados: O Instituto adequou e modernizou seus laboratórios de pesquisa criando o Centro de Estudos em Biodefesa, com Nível de Biossegurança NB-3. Com base na necessidade de organização para atender às demandas da defesa biológica, o IBEx vem aprimorando sua estrutura para dominar e garantir novas tecnologias de identificação e manejo dos microrganismos envolvidos em Bioterrorismo. Conclusão: A compilação de metodologias na forma de um Compêndio proporcionou a operacionalização da Coleção de Cultura do IBEx.

Objective: The Compendium of Methods and Good Practices in Yeast Culture Collection of the Brazilian Army Biology Institute (IBEx) was elaborated with the purpose of operationalizing the research activities, guaranteeing the safe and reliable performance of its regimental objectives. Methods: The IBEx Yeast Culture Collection was created from isolated strains of systemic candidiasis, through the use of manual and automated methodologies to authenticate them, in order to guarantee scientific research and teaching activities. Results: The Institute adapted and modernized its research laboratories by creating the Center for Biodefense Studies, with Biosafety Level NB-3. Based on the need for organization to meet the demands of biological defense, the IBEx has been improving its structure to dominate and guarantee new technologies of identification and management of the microorganisms involved in Bioterrorism. Conclusion: The compilation of methodologies in the form of a Compendium provided the operationalization of the IBEx Culture Collection

Avaliação microbiológica e sensorial de alfajor vegano e sem glúten elaborado a partir da farinha de okara de amendoim / Microbiological analysis and sensory evaluation of a vegan gluten free alfajor produced with okara peanut flour

O veganismo cresceu nos últimos anos e é cada vez maior o número de pessoas que praticam uma dieta com restrições alimentares. O objetivo do trabalho foi desenvolver um alfajor vegano sem glúten, utilizando farinha de okara de amendoim e avaliar suas características microbiológicas e aceitação sensorial. As amostras foram submetidas a testes sensoriais de aceitação e microbiológicos para coliformes, bolores e leveduras. Os testes para coliformes foram realizados utilizando-se Caldo Lauril Sulfato Triptose e para a análise de bolores e leveduras foi realizada a contagem total por plaqueamento em superfície nos meios Ágar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol e Ágar Batata Dextrose. A formulação obteve boa aceitação e os resultados das análises microbiológicas mostraram que o produto possui qualidade microbiológica satisfatória de pelo menos seis dias. Logo, a utilização da farinha de okara de amendoim se mostrou interessante para o desenvolvimento de um alfajor venago e sem glúten.

Influence of packaging on the quality of Brazil nuts / Influência da embalagem na qualidade de castanhas-do-brasil

The Brazil nut is an important commodity that grows in the Amazon rainforest and is notable for its high nutritional value. However, the effect that packaging has on product shelf-life is unclear. This study evaluated the microbiological and nutritional quality of unshelled Brazil nuts packed in (a) nylon and polypropylene under vacuum, and (b) in polyethylene terephthalate and polyethylene aluminized films. The nuts were stored for nine months under natural environmental conditions. The most probable number of total and thermotolerant coliforms and Escherichia coli, and counting of molds and yeast were determined in the unshelled nuts shortly after collection and every three months during storage. Moisture, lipids, ash, neutral detergent fiber, and acid detergent fiber contents were measured by the gravimetric method. Crude protein content was measured using the Kjeldahl method. Coliform levels were within legislated standards in both types of packaging. Mold and yeast growth increased with time in both types of packaging (0.1x10¹ to 9.5x10³ colony forming units g-1), but only nuts packaged in aluminum film showed a significant increase after six months of storage. After nine months of storage, both types of packaged nuts had good nutritional quality. Aluminized packaging resulted in better conservation of the lipid fraction and lower permeability to water vapor, however, vacuum packaging was more effective in controlling fungal growth, possibly due to the lack of oxygen.

As castanhas-do-brasil são um importante produto da floresta amazônica e destacam-se pelo seu alto valor nutricional. Contudo, os efeitos da embalagem sobre a vida de prateleira das castanhas não estão completamente esclarecidos. Sendo assim, neste estudo, avaliou-se a qualidade microbiológica e nutricional de castanhas-do-brasil descascadas, embaladas em (a) nylon mais polipropileno a vácuo e (b) filmes aluminizados de polietileno tereftalato (PET) e polietileno (PE). As castanhas foram armazenadas por um período de nove meses, sob condições ambientais naturais. Logo após a coleta, e a cada três meses, foram determinados nas castanhas o número mais provável de coliformes totais, coliformes termotolerantes e Escherichia coli, e contagem total de bolores e leveduras. Também foram medidos os teores de umidade, lipídeos, cinzas, fibra em detergente neutro e fibra em detergente ácido por métodos gravimétricos, e os teores de proteína bruta por meio do método de Kjeldahl. Os níveis de coliformes termotolerantes estiveram dentro dos padrões da legislação nos dois tipos de embalagem. A incidência de bolores e leveduras aumentou ao longo do tempo nas duas embalagens (de 0,1x10¹ a 9,5x10³ unidades formadoras de colônia; UFC g-1), porém somente a embalagem aluminizada apresentou aumento significativo após seis meses de armazenamento. Após nove meses, as castanhas nas duas embalagens apresentaram boa qualidade nutricional, porém a embalagem aluminizada apresentou melhor conservação da fração lipídica e menor permeabilidade a vapores de água. Contudo, a embalagem a vácuo foi mais eficiente no controle do crescimento de fungos, possivelmente devido à ausência de oxigênio.

Identification and susceptibility of clinical isolates of Candida spp. to killer toxins / Identificação e susceptibilidade de isolados clínicos de Candida spp. para toxinas assassinas

Abstract Although invasive infections and mortality caused by Candida species are increasing among compromised patients, resistance to common antifungal agents is also an increasing problem. We analyzed 60 yeasts isolated from patients with invasive candidiasis using a PCR/RFLP strategy based on the internal transcribed spacer (ITS2) region to identify different Candida pathogenic species. PCR analysis was performed from genomic DNA with a primer pair of the ITS2-5.8S rDNA region. PCR-positive samples were characterized by RFLP. Restriction resulted in 23 isolates identified as C. albicans using AlwI, 24 isolates as C. parapsilosis using RsaI, and 13 as C. tropicalis using XmaI. Then, a group of all isolates were evaluated for their susceptibility to a panel of previously described killer yeasts, resulting in 75% being susceptible to at least one killer yeast while the remaining were not inhibited by any strain. C. albicans was the most susceptible group while C. tropicalis had the fewest inhibitions. No species-specific pattern of inhibition was obtained with this panel of killer yeasts. Metschnikowia pulcherrima, Pichia kluyveri and Wickerhamomyces anomalus were the strains that inhibited the most isolates of Candida spp.

Resumo Embora as infecções invasivas e a mortalidade causada por espécies de Candida estejam aumentando entre pacientes comprometidos, a resistência a agentes antifúngicos comuns também é um problema crescente. Analisamos 60 leveduras isoladas de pacientes com candidíase invasiva utilizando como estratégia PCR/RFLP baseada na região espaçadora transcrita interna (ITS2) para identificar diferentes espécies patogênicas de Candida. A análise por PCR foi realizada a partir de ADN genómico com um par de iniciadores da região ITS2-5.8S rDNA. As amostras PCR-positivas foram caracterizadas por RFLP. A restrição resultou em 23 isolados identificados como C. albicans usando AlwI, 24 isolados como C. parapsilosis usando RsaI e 13 como C. tropicalis usando XmaI. Em seguida, avaliou-se o grupo de todos os isolados quanto à sua susceptibilidade a um painel de leveduras killer previamente descritas, resultando em 75% sendo suscetíveis a pelo menos uma levedura killer, enquanto que as restantes não foram inibidas por qualquer cepa. C. albicans foi o grupo mais suscetível enquanto C. tropicalis teve o menor número de inibições. Não se obteve um padrão de inibição específico da espécie com este painel de leveduras killer. Metschnikowia pulcherrima, Pichia kluyveri e Wickerhamomyces anomalus foram as cepas que inibiram a maioria dos isolados de Candida spp.

Antifungal susceptibility profile of diferent yeasts isolates from wild animals, cow's milk with subclinical mastitis and hospital environment / Perfil de suscetibilidade antifúngica de diferentes leveduras isoladas da microbiota de animais silvestres, leite com mastite subclínica e ambiente hospitalar

Abstract Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cow's milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1μg/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.

Resumo As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek® 2. O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek® 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1- Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H) (36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek®, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H) foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.

Effectiveness of carboxylic acids from Pichia membranifaciens against coffee rust / Eficácia do ácido carboxílico de Pichia membranifaciens contra a ferrugem do cafeeiro

ABSTRACT Coffee rust is a fungal disease that has affected every coffee-producing region in the world. Given that the effectivity of the protectant and systemic fungicides applied routinely to control the spread of the causative agent of the disease (Hemileia vastatrix) has gradually diminished, besides are harmful to mammals and ecosystems, the objective of this work was to search for a mixture of harmless natural compounds with the potential to be applied in the field. So, a yeast strain producing a battery of long-chain carboxylic acids (CA) with fungicide properties was isolated from soil of coffee crop and identified as Pichia membranifaciens by ITS sequencing. Culture conditions of the yeast were optimized and the CA in the solution were characterized by Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) as ethyl formate (55.5 g L-1), octadecenoic acid (3.5 g L-1), propionic acid (7.2 g L-1), 3-(octadecanoyl)-propionic acid (7.2 g L-1) and methyl acetate (8.4 g L-1). Randomized field studies were conducted in three different locations in Chiapas, México. Five treatments were tested including three concentrations of the CA solution (389, 584 and 778 ppm) and copper oxychloride (5 000 ppm) as conventional control. The initial coffee rust incidence averages varied between sites: Maravillas (3-9%), Santo Domingo (10-16%) and Búcaro (16-22%). The treatments of CA solution proved to be effective at slowing down the progress of the rust disease even for the sites where initial incidence was high. Likewise, the CA solution reduced the viability of H. vastatrix spores, as assessed by fluorescence microscopy.

RESUMO A ferrugem do cafeeiro é uma doença que tem afetado as regiões produtoras de café no mundo. Considerando que os funguicidas protetores e sistemáticos que são aplicados rotinariamente para controlar a difusão do agente causador da doença (Hemileia vastatrix) são nocivos para os humanos, animais e ecossistemas, o objetivo deste trabalho é determinar um componente natural com potencial de uso. Uma cepa de levedura produzindo uma bateria de ácidos carboxílicos com ação funguicida foi isolada do solo e identificada como Pichia membranifaciens por sequenciamento ITS. Foram optimizadas as condições de cultura e os ácidos carboxílicos presentes na semi purificada sobrenadante (solução CA) foram caracterizados por cromatografia de gás espectometia de massa (GC-MS) como formato de etilo (55.5 g L-1), ácido octadecenóico (3.5 g L-1), ácido propiônico (7.2 g L-1), 3-(octadecanoil)-ácido propiônico 7.2 g L-1) e acetato de metilio (8.4 g L-1). Estudos do campo foram conduzidos em três locais na região de Chiapas, Mexico. Cinco tratamentos foram testados incluindo três concentrações da solução CA (389, 584 e 778 ppm) e o funguicida comercial contendo oxicloreto de cobre (500 ppm). As médias iniciais de incidência da ferrugem do cafeeiro variou em função do local: Maravilla (3-9%), Santo domingo (10-16%) e Búcaro (16-22%). A solução CA provou ser efetiva retardando o progresso da doença, mesmo nos locais onde a incidência inicial foi elevada. A solução CA reduziu a viabilidade dos esporos de H. Vastatrix, observado por meio de fluorescência.

Microbiological profile and aerobic stability of Tifton 85 bermudagrass silage with or without vacuum and microbial inoculants / Perfil microbiológico e estabilidade aeróbia em silagem de capim-tifton 85, a vácuo e sem vácuo, adicionados ou não inoculante microbiano

This study aimed to evaluate the microbiological profile and aerobic stability of grass silage Tifton 85, with or without vacuum, and with or without microbial inoculants. The experimental design was completely randomized in a 2 x 2 factorial design, where the treatments included five replicates, with and without vacuum or addition of inoculants. The inoculum consisted of lactic acid bacteria (LAB), specifically Lactobacillus acidophilus, at a concentration of 3 x 109 CFU mL-1 per mL. The analyzed variables included the microbiological profile after opening the silage, as well as the aerobic stability at the time of opening on the sixth day of the silage's exposure to oxygen. It was found that no variation occurred in the population of lactic acid bacteria between the applied treatments. The Bacillus population was lower irrespective of the inoculant application, since it was applied in vacuum. When the population of Clostridium was applied, there was a reduction in the inoculant population in the vacuum system compared to that of the non-vacuum system. Without applying the inoculant, there was also a reduction in the population of Clostridium in the non-vacuum system. The yeast population showed linear growth in all of the evaluated treatments from the first to the sixth day of exposure to air, which may have contributed to the high temperatures observed during the air exposure period. There was no growth of fungi in the silage during the period of exposure to oxygen. The breaking of the aerobic stability occurred from the 3rd day after opening the silage. The pH was below the level that is considered to be good for silage preservation at the time of opening. In addition, during the exposure to oxygen, the same phenomenon occurred with the temperature, which demonstrated a quadratic behavior during the study period. Under the conditions evaluated, Tifton 85 bermudagrass silage lost its stability after the third day of exposure to air.

A pesquisa objetivou avaliar o perfil microbiológico e a estabilidade aeróbia em silagens de capim Tifton 85, a vácuo e sem vácuo, adicionados ou não inoculante microbiano. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x2, sendo os tratamentos com e sem vácuo e com e sem adição de inoculante, com cinco repetições. O inoculante era composto por bactérias ácido láticas (BAL): Lactobacillus acidophilus, na concentração de 3 x 109 UFC ml-1 de células viáveis por ml do produto. As variáveis analisadas foram o perfil microbiológico após abertura da silagem e a estabilidade aeróbia da abertura ao sexto dia de exposição da silagem ao oxigênio. Verificou-se que não houve variação na população de bactérias láticas entre os tratamentos aplicados. A população de Bacillus foi inferior tanto com aplicação quanto sem aplicação de inoculante desde que aplicado o vácuo. A população de Clostridium quando aplicado o inoculante, o sistema a vácuo reduziu a população em comparação ao sistema sem vácuo. Sem a aplicação de inoculante o sistema sem vácuo reduziu a população de Clostridium. A população de leveduras apresentou tendência a crescimento linear em todos os tratamentos avaliados do primeiro ao sexto dia de exposição ao oxigênio o que pode ter contribuído para as altas temperaturas observadas no período de exposição ao ar. Não se observou crescimento de fungos nas silagens durante o período de exposição ao ar. A quebra da estabilidade aeróbia ocorreu a partir do 3º dia após abertura da silagem. O pH ficou abaixo do preconizado para uma boa conservação da silagem na abertura e durante a exposição ao oxigênio, com comportamento quadrático, o mesmo ocorrendo com a temperatura no período avaliado. Silagens de capimtifton 85 nas condições avaliadas perdem a estabilidade após o terceiro dia de exposição ar.

Eficacia de un aditivo de levadura en cerdas jóvenes que consumen piensos contaminados con zearalenona / Efficacy of a yeast additive to mitigate the effects of zearalenone-contaminated feed in gilts / Eficácia de um aditivo de levedura para leitoas que consomem ração contaminada por zearalenona

Resumen Antecedentes: Las micotoxinas representan pérdidas económicas significativas para la industria porcina, por lo que los adsorbentes de pared celular de levadura son una alternativa para reducir este problema. Objetivo: Evaluar la eficacia de un aditivo anti-micotoxinas (AAM; Safmannan®) en la prevención de micotoxicosis resultante de la ingesta de zearalenona (ZEA). Métodos: Fueron utilizadas 36 hembras porcinas jóvenes, cuyas dietas incorporaron dos niveles de inclusión del AAM (basado en la pared celular de Saccharomyces cerevisiae; 0 y 0,2%) y tres niveles de inclusión de ZEA (0, 0,25 y 0,6 ppm). El ensayo tuvo una duración total de 21 d, durante los cuales se efectuaron evaluaciones semanales de peso corporal, ganancia de peso, consumo de alimento y el volumen de la vulva. Igualmente, se midieron los pesos relativos de hígado, tracto reproductivo total y el conjunto útero-ovario-vagina. Resultados: Los resultados obtenidos comprueban la eficacia del AMA utilizado, toda vez que su suplementación evitó los efectos tóxicos de ZEA y mejoró los índices en órganos reproductivos como el volumen de la vulva, peso relativo del tracto reproductivo y el conjunto útero-ovario-vagina en animales intoxicados. Sin embargo, los efectos anti-micotoxinas fueron fijos para ambos niveles (0,25 y 0,6 ppm) de ZEA. Conclusión: La adición de AAM en las dietas que contienen ZEA demostró ser una alternativa eficiente para reducir los efectos tóxicos de esta micotoxina.

Abstract Background: Mycotoxins are a significant cause of economic losses in swine farming and adsorbents based on yeast cell walls provide an alternative solution to reducing this challenge. Objective: To evaluate the efficacy of an antimycotoxin additive (AMA; Safmannan®) for preventing the toxic effects of zearalenone (ZEA). Methods: A total of 36 pre-pubertal gilts were used, whose diets consisted of two different levels of AMA (based on the yeast cell wall of Saccharomyces cerevisiae; 0 and 0.2%) and three inclusion levels of ZEA (0, 0.25, and 0.6 ppm). The experiment was conducted for a period of 21 d and the following parameters were measured weekly: Live weight, weight gain, feed intake, and vulvar volume. The relative weight of the liver and the entire reproductive tract, including the uterus-ovary-vagina combined were also measured. Results: There was a significant enhancement in the index characteristics of reproductive organs like vulvar volume, weight of the entire reproductive tract and weight of the uterus-ovary-vagina of the intoxicated animals. The antimycotoxin effects were the same, irrespective of the ZEA levels (0.25 and 0.6 ppm). Conclusion: The addition of AMA to diets containing ZEA proved to be an effective alternative for reducing the toxic effects of this mycotoxin.

Resumo Antecedentes: As micotoxinas determinam perdas econômicas importantes para suinocultura e os adsorventes à base de parede celular de leveduras são uma alternativa para reduzir este problema. Objetivo: Avaliar a eficácia de um aditivo anti-micotoxina (AAM; Safmannan®) na prevenção da micotoxicose decorrente da ingestão de zearalenona (ZEA). Métodos: Foram utilizadas 36 leitoas pré-púberes, cujas dietas apresentaram dois níveis de inclusão de AAM (à base de parede celular de Saccharomyces cerevisiae; 0 e 0,2%) e três níveis de inclusão de ZEA (0, 0,25 e 0,6 ppm). O período experimental teve duração total de 21 d, sendo realizadas avaliações semanais de peso vivo, ganho de peso, consumo de ração e volume vulvar. Pesos relativos de fígado, trato reprodutivo total e o conjunto útero-ovário-vagina também foram calculados. Resultados: Os resultados obtidos demonstram a eficácia do AAM, pois a sua inclusão demonstrou prevenir os efeitos tóxicos da ZEA, já que os índices em órgãos reprodutivos como volume vulvar, peso relativo do trato reprodutivo total e do conjunto útero-ovário-vagina foram maiores nos animais intoxicados e sem suplementação. Porém, o efeito anti-micotoxina foi fixo, sendo o mesmo para os dois níveis de ZEA (0.25 e 0.6 ppm). Conclusão: A adição do AAM em questão nas dietas contendo ZEA demonstrou ser uma alternativa eficiente para redução dos efeitos tóxicos desta micotoxina.

Qualidade microbiológica de manteigas extra qualidade / Microbiological quality of extra quality butters

A manteiga é um produto lácteo fabricado a partir do creme de leite pasteurizado. É necessária uma série de condições e cuidados, desde a obtenção da matéria-prima até a sua comercialização, para evitar o comprometimento da sua qualidade e evitar danos à saúde do consumidor. Nessa perspectiva, este trabalho avaliou a qualidade microbiológica de diferentes marcas de manteiga extra qualidade comercializadas no norte do Mato Grosso. Foram determinados coliformes totais, termotolerantes e Escherichia coli, bolores e leveduras. Todas as marcas avaliadas apresentaram resultados negativos para coliformes. Os resultados da contagem de bolores e leveduras variaram de 1,0x102 a 8,37x104 UFC/g.(AU)

Qualidade microbiológica de açaí industrializado / Microbiological quality of industrialized açai

Amostras de açaí (Euterpe oleracea Mart.) tipo fino congeladas e sem adição de quaisquer outros ingredientes foram adquiridas no comércio varejista da cidade do Rio de Janeiro. Foram analisadas microbiologicamente 54 amostras, pertencentes a 6 diferentes marcas (A, B, C, D, E e F). Todas as amostras analisadas encontravam-se dentro do prazo de validade estabelecido pelo fabricante e as empresas eram registradas no MAPA. Os micro-organismos analisados foram: Salmonella, Escherichia coli, fungos filamentosos e leveduras, de acordo com o preconizado pela legislação brasileira vigente. Considerando-se o limite máximo possível estabelecido pela lei, 2 lotes de cada marca B, E e F e 1 lote de cada marca C e D apresentaram contagens acima do permitido para fungos filamentosos e leveduras. Apenas 2 amostras apresentaram contagens de Escherichia coli, ambas estando fora do máximo estabelecido pela legislação vigente. Constatou- -se ausência de Salmonella em todas as amostras analisadas. A presença de fungos filamentosos, leveduras e Escherichia coli pode ser um indicativo de práticas inadequadas durante a fabricação do açaí. Assim, é importante ressaltar a necessidade de um controle rigoroso da cadeia do frio, uma vez que esses micro-organismos podem ser responsáveis pela deterioração do produto.

Antifungal susceptibility profile of diferent yeasts isolates from wild animals, cows milk with subclinical mastitis and hospital environment

Abstract Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cows milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1g/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.

Resumo As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek® 2. O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek® 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1- Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H) (36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek®, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H) foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.

Identification and susceptibility of clinical isolates of Candida spp. to killer toxins

Abstract Although invasive infections and mortality caused by Candida species are increasing among compromised patients, resistance to common antifungal agents is also an increasing problem. We analyzed 60 yeasts isolated from patients with invasive candidiasis using a PCR/RFLP strategy based on the internal transcribed spacer (ITS2) region to identify different Candida pathogenic species. PCR analysis was performed from genomic DNA with a primer pair of the ITS2-5.8S rDNA region. PCR-positive samples were characterized by RFLP. Restriction resulted in 23 isolates identified as C. albicans using AlwI, 24 isolates as C. parapsilosis using RsaI, and 13 as C. tropicalis using XmaI. Then, a group of all isolates were evaluated for their susceptibility to a panel of previously described killer yeasts, resulting in 75% being susceptible to at least one killer yeast while the remaining were not inhibited by any strain. C. albicans was the most susceptible group while C. tropicalis had the fewest inhibitions. No species-specific pattern of inhibition was obtained with this panel of killer yeasts. Metschnikowia pulcherrima, Pichia kluyveri and Wickerhamomyces anomalus were the strains that inhibited the most isolates of Candida spp.

Resumo Embora as infecções invasivas e a mortalidade causada por espécies de Candida estejam aumentando entre pacientes comprometidos, a resistência a agentes antifúngicos comuns também é um problema crescente. Analisamos 60 leveduras isoladas de pacientes com candidíase invasiva utilizando como estratégia PCR/RFLP baseada na região espaçadora transcrita interna (ITS2) para identificar diferentes espécies patogênicas de Candida. A análise por PCR foi realizada a partir de ADN genómico com um par de iniciadores da região ITS2-5.8S rDNA. As amostras PCR-positivas foram caracterizadas por RFLP. A restrição resultou em 23 isolados identificados como C. albicans usando AlwI, 24 isolados como C. parapsilosis usando RsaI e 13 como C. tropicalis usando XmaI. Em seguida, avaliou-se o grupo de todos os isolados quanto à sua susceptibilidade a um painel de leveduras killer previamente descritas, resultando em 75% sendo suscetíveis a pelo menos uma levedura killer, enquanto que as restantes não foram inibidas por qualquer cepa. C. albicans foi o grupo mais suscetível enquanto C. tropicalis teve o menor número de inibições. Não se obteve um padrão de inibição específico da espécie com este painel de leveduras killer. Metschnikowia pulcherrima, Pichia kluyveri e Wickerhamomyces anomalus foram as cepas que inibiram a maioria dos isolados de Candida spp.

Identification and susceptibility of clinical isolates of Candida spp. to killer toxins

Abstract Although invasive infections and mortality caused by Candida species are increasing among compromised patients, resistance to common antifungal agents is also an increasing problem. We analyzed 60 yeasts isolated from patients with invasive candidiasis using a PCR/RFLP strategy based on the internal transcribed spacer (ITS2) region to identify different Candida pathogenic species. PCR analysis was performed from genomic DNA with a primer pair of the ITS2-5.8S rDNA region. PCR-positive samples were characterized by RFLP. Restriction resulted in 23 isolates identified as C. albicans using AlwI, 24 isolates as C. parapsilosis using RsaI, and 13 as C. tropicalis using XmaI. Then, a group of all isolates were evaluated for their susceptibility to a panel of previously described killer yeasts, resulting in 75% being susceptible to at least one killer yeast while the remaining were not inhibited by any strain. C. albicans was the most susceptible group while C. tropicalis had the fewest inhibitions. No species-specific pattern of inhibition was obtained with this panel of killer yeasts. Metschnikowia pulcherrima, Pichia kluyveri and Wickerhamomyces anomalus were the strains that inhibited the most isolates of Candida spp.

Resumo Embora as infecções invasivas e a mortalidade causada por espécies de Candida estejam aumentando entre pacientes comprometidos, a resistência a agentes antifúngicos comuns também é um problema crescente. Analisamos 60 leveduras isoladas de pacientes com candidíase invasiva utilizando como estratégia PCR/RFLP baseada na região espaçadora transcrita interna (ITS2) para identificar diferentes espécies patogênicas de Candida. A análise por PCR foi realizada a partir de ADN genómico com um par de iniciadores da região ITS2-5.8S rDNA. As amostras PCR-positivas foram caracterizadas por RFLP. A restrição resultou em 23 isolados identificados como C. albicans usando AlwI, 24 isolados como C. parapsilosis usando RsaI e 13 como C. tropicalis usando XmaI. Em seguida, avaliou-se o grupo de todos os isolados quanto à sua susceptibilidade a um painel de leveduras killer previamente descritas, resultando em 75% sendo suscetíveis a pelo menos uma levedura killer, enquanto que as restantes não foram inibidas por qualquer cepa. C. albicans foi o grupo mais suscetível enquanto C. tropicalis teve o menor número de inibições. Não se obteve um padrão de inibição específico da espécie com este painel de leveduras killer. Metschnikowia pulcherrima, Pichia kluyveri e Wickerhamomyces anomalus foram as cepas que inibiram a maioria dos isolados de Candida spp.

Sensitivity to antifungals by Candida spp samples isolated from cases of chronic atrophic candidiasis (CAC)

Abstract The treatment of choice for chronic atrophic candidiasis (CAC), also known as denture stomatitis, is topical antifungal therapy. This study aimed to isolate, identify, and assess the antifungal susceptibility of Candida species from mucosal sites in denture wearers with a diagnosis of CAC and determine the prevalence of associated variables. The sample consisted of 44 patients wearing complete or partial dentures who had a clinical diagnosis of CAC. Using sterile cotton swabs, specimens were collected from the oral mucosa of all patients and grown at 30ºC for 48 h in CHROMagar Candida, as a means of isolating and screening the species. The complementary identification of the species was performed using the VITEK 2 automated system (BioMérieux), as well as the determination of their susceptibility to antifungal agents. Data were analyzed using the chi-square test. STATA 13.1 was used for statistical analysis ( = 5%). Of 44 patients with CAC, 33 (75%) had lesions classified as Newton type II. Yeasts were isolated in 38 cases. The most prevalent species was Candida albicans. None of the isolates were resistant to the antifungals tested. Our findings suggest that current indications for antifungal agents are appropriate. Also, antifungal susceptibility testing and proper fungal identification can help dentists to determine the optimal course of treatment for CAC.

Resumo O tratamento de escolha para candidíase atrófica crônica (CAC), também conhecida como estomatite protética, é a terapia antifúngica tópica. Este estudo teve como objetivo isolar, identificar e avaliar a susceptibilidade antifúngica de espécies de Candida de locais mucosos em portadores de prótese com diagnóstico de CAC e determinar a prevalência de variáveis associadas. A amostra consistiu em 44 pacientes portadores de próteses completas ou parciais que tiveram um diagnóstico clínico de CAC. Usando swab estéril, foram coletados espécimes da mucosa oral de todos os pacientes e cultivados a 30ºC durante 48 h em CHROMagar Candida, como forma de isolamento e triagem das espécies. A identificação complementar das espécies foi realizada no sistema automatizado VITEK 2 (BioMérieux), bem como a determinação da susceptibilidade delas a agentes antifúngicos. Os dados foram analisados usando o teste do qui-quadrado. O STATA 13.1 foi utilizado para análise estatística ( = 5%). Dos 44 pacientes com CAC, 33 (75%) apresentaram lesões classificadas como Newton tipo II. As leveduras foram isoladas em 38 casos. A espécie mais prevalente foi Candida albicans. Nenhum dos isolados foi resistente aos antifúngicos testados. Nossas descobertas sugerem que as indicações atuais para os agentes antifúngicos são apropriadas. Além disso, testes de susceptibilidade antifúngicos e identificação fúngica adequada podem ajudar os dentistas a determinar o curso ótimo de tratamento para CAC.

Evaluation of a mycotoxin adsorbent in swine diets containing barley naturally contaminated with Fusarium mycotoxins / Evaluación de un adsorbente de micotoxinas en dietas para cerdos que contienen cebada contaminada naturalmente con micotoxinas de Fusarium / Avaliação de um adsorvente de micotoxinas em suínos dieta contendo cevada naturalmente contaminado com micotoxinas Fusarium

Summary Background: contamination of barley with Fusarium mycotoxins causes significant economic losses for pork producers, and alleviation with mycotoxin sequestering agents has proven inconsistent. Objective: to evaluate a yeast cell wall product in preventing adverse effects of Fusarium mycotoxins on growth performance, blood characteristic, and nutrient digestibility in gilts fed diets containing barley naturally contaminated with Fusarium mycotoxins. Methods: positive and negative controls of corn-soybean meal diets containing 20% control and contaminated barley with Fusarium mycotoxins, respectively, were prepared. Two additional diets were prepared by adding 0.2 or 0.4% of a yeast cell wall product to the negative control diet. The experimental diets were fed to pigs with 61.7 Kg initial body weight for 2 weeks. Results: pigs fed the negative control diet gained less than those fed the positive control diet (p<0.05) from d 0 to 7 and during the overall period, but nutrient digestibility and blood characteristics were not affected by feeding the contaminated diet. Most measurements were not affected by supplementing the yeast cell wall to the negative control diet. Conclusion: addition of the yeast cell wall product to negative control diets failed to ameliorate the adverse effects of dietary Fusarium mycotoxin on growth performance.

Resumen Antecedentes: la contaminación de la cebada con micotoxinas de Fusarium causa importantes pérdidas económicas para los productores de carne de cerdo, pero adsorbentes de micotoxinas para prevenir los efectos perjudiciales de las micotoxinas no dieron resultados consistentes. Objetivo: evaluar el producto de la pared celular de la levadura en la prevención de los efectos adversos de las micotoxinas de Fusarium sobre el crecimiento, características de la sangre, y la digestibilidad de nutrientes en cerdas jóvenes alimentadas con dietas que contienen cebada naturalmente contaminada con micotoxinas de Fusarium. Métodos: se prepararon las dietas a base de harina de maíz-soja de control positivo y negativo contienen 20% de control y cebada contaminados con micotoxinas de Fusarium, respectivamente. Adicionalmente se prepararon 2 dietas con productos de la pared celular de levadura de 0,2 o 0,4% a la dieta de control negativo. Fueron alimentados con las dietas experimentales cerdos con un peso corporal inicial de 61,7 Kg durante 2 semanas. Resultados: los cerdos alimentados con la dieta control negativo ganaron menos que aquellos alimentados con la dieta control positivo (p<0,05) a partir del d 0 a 7 y durante el período en general, pero la digestibilidad de los nutrientes y características de la sangre no fueron afectados por la alimentación de la dieta contaminada. La mayoría de las mediciones no fueron afectadas por la suplementación de la pared celular de la levadura con la dieta control negativo. Conclusión: la adición del producto de pared celular de levadura a la dieta control negativo no logró aminorar los efectos adversos de las micotoxinas de Fusarium sobre el crecimiento.

Resumo Antecedentes: a contaminação da cevada com a micotoxinas Fusarium causa perdas econômicas significativas para os produtores de suínos, porèm os adsorventes de micotoxinas que evitam efeitos prejudiciais de micotoxinas não deram resultados consistentes. Objetivo: avaliar o produto da parede celular das leveduras para prevenir efeitos adversos da micotoxinas Fusarium no desempenho do crescimento, inchaço da vulva, característica do sangue, digestibilidade dos nutrientes em porcas jòvens que são alimentadas com dietas contendo a cevada naturalmente contaminada com micotoxinas do Fusarium. Métodos: foram preparadas dietas de controle positivo e negativo à base de milho e soja, contendo 20% do controle e cevada contaminada com micotoxinas Fusarium, respectivamente. Duas dietas adicionais foram preparadas complementando com 0,2 ou 0,4% o produto da parede celular das leveduras à dieta do controle negativo. As dietas experimentais foram fornecidas aos suínos com peso corporal inicial de 61,7 Kg por 2 semanas. Resultados: os suínos alimentados com a dieta do controle negativo ganharam menos peso do que aqueles alimentados com a dieta do controle positivo (p<0,05) a partir do dia 0 até 7 durante todo o período, a digestibilidade dos nutrientes e as características do sangue não foram afetadas pela alimentação da dieta contaminada. A maioria das medidas não foram afetadas pela complementação da parede celular das leveduras à dieta do controle negativo. Conclusão: a complementação do produto da parede celular das leveduras nas dietas de controle negativo não conseguiu melhorar o efeito adverso das micotoxinas Fusariume no desempenho de crescimento.

Avaliação da qualidade de queijo parmesão ralado de diferentes marcas comerciais / Quality evaluation of grated parmesan cheese from different brands

O queijo parmesão é um produto bastante consumido no país, principalmente na forma ralada e existem poucos trabalhos científicos disponíveis na literatura, abordando a qualidade do produto comercializado. Assim, torna-se necessário, avaliar as diferentes marcas de queijo parmesão ralado disponíveis no mercado. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar a qualidade físico-química de queijo parmesão ralado de oito diferentes marcas comercializadas nos estados de Minas Gerais e do Espírito Santo, verificando se os produtos atendem aos padrões estabelecidos pela legislação vigente. Foram realizadas as análises físico-químicas de umidade, cinzas e cloretos, análise qualitativa de amido e análise microbiológica de bolores e leveduras, em três repetições. A metade das marcas avaliadas apresentou teor de umidade fora do padrão estabelecido pelo regulamento técnico para fixação de identidade e qualidade de queijo ralado, onde o valor máximo de umidade é de 20,0% para o queijo parmesão ralado. Dentre as quatro marcas irregulares, a umidade variou de 20,69% a 33,28%, indicando uma elevada variação acima do limite estabelecido. Na análise de cloretos foram encontrados teores entre 3,32% e 8,17%, bem como a análise de cinzas apresentou resultados variando entre 6,62% e 10,31%, indicando a ocorrência de uma elevada variação nos processos tecnológicos de produção, principalmente na etapa de salga, a qual influencia no teor de cinzas. Em nenhuma amostra foi detectada a presença de amido, indicando que não houve a adição indevida do mesmo aos produtos. Em relação à presença de bolores e leveduras, 12,5% das amostras avaliadas apresentaram contagens acima do limite estabelecido pela legislação, inconformidade que pode estar relacionada às condições de processamento e armazenamento inadequadas.

Parmesan is widely consumed in Brazil, mainly in the shredded form and few studies are available on literature about the commercial product quality. Thus, it is necessary to evaluate different brands available in the market. The aim of this study was to evaluate the physical-chemical quality of parmesan shredded cheese from eight different brands available in Minas Gerais and Espírito Santo State, Brazil, markets, evaluating their accordance to food legislation. Moisture content, chloride, minerals, starch qualitative analysis and microbiological analysis for yeasts and molds were the physical-chemical evaluations, carried out in three replications. Half of the evaluated brands presented moisture content outside the established standard for the identity and quality of the shredded cheese, in which the maximum moisture content is 20.0% for the shredded parmesan cheese. Between the four brands outside the standard, the moisture content varied from 20.69 to 33.28%, indicating a high variation above the established standard. For chlorides, contents from 3.32 to 8.17% were observed and for total minerals the results varied from 6.62 to 10.31%, indicating a high variation in the steps of production, mainly on cheese salting, which can influence the minerals content. No starch was observed in the samples, indicating that no starch addition was made in the products. For the yeasts and molds evaluations, 12.5% of the samples presented the counting above the legislation established limit, which could be related to the processing and storage conditions.